在蛋白和抗體純化工作中，如何準確的進行定量一直是一個棘手的問題。傳統的方如Bradford，BCA等操作繁瑣，耗時長，而通過測定蛋白質的紫外吸收來定量，則非常快速方便。

蛋白質擁有的紫外吸收性質是來自芳香族氨基酸如色氨酸、酪氨酸分子內含有共軛雙鍵，在280納米波長附近具有最大的光吸收峰。由于大多數蛋白質均含有酪氨酸、色氨酸殘基，所以測定蛋白質在280納米波長處的吸光度，是分析溶液中蛋白質含量的一種最快速簡便的方法。

其優點是快速，對樣品無破壞，缺點在于此法是根據酪氨酸（Tyr），苯丙氨酸（Phe），色氨酸（Trp）殘基的強吸收值來測定的，不同的蛋白質其含量不同，所以當蛋白中缺乏這幾種氨基酸時，定量就不準了，就得考慮其他方法。另外核酸，和其他所有含有苯環共軛π鍵的物質（如蛋白洗脫用的咪唑）都會影響其定量，在測定前應先透析除去。

一、如何利用微量分光光度計來測定蛋白濃度

01  首先打開軟件，選擇Protein A280。

02  再在右上角選擇樣品的類型，1Abs=1mg/ml為測定未知蛋白的選項（如果是測試抗體濃度，可以選擇igG預設參數，大部分廠家的設備都含有這個參數）。

03  然后用純水將比色皿清洗三次，選擇合適的溶液作為背景，滴入2μl，按blank減去背景。再用純水將比色皿清洗三次，滴入2μl樣品，按measure測定。下方就會顯示樣品的A280值即為濃度。

04  到這一步還沒完！

還需要到https://web.expasy.org/protparam/，上輸入蛋白的序列來查找消光系數，用測得的A280除以該蛋白的消光系數，才是最終的準確濃度。

菲恩生物嚴格把控每一個生產的蛋白或抗體產品的質量，質控方面使用傳統的SDS-Page膠染色,對比標準品濃度的BSA蛋白，確定濃度和純度，同時參考全進口微量分光光度計以獲得最準確的數據，讓產品在純度和濃度上不會出現偏差。

二、舉例菲恩生產蛋白驗證的過程的結果圖(DOG43為蛋白編號)

01  12%SDS-PAGE驗證（其中BSA標準品為1mg，上樣10ul）

02  DOG43蛋白序列進行分析，計算消光系數。

03  微量分光光度計濃度測定結果。